艾狄斯®25羟基维生素DS检测试剂盒（酶联免疫法）
英文名称： 25-Hydroxy Vitamin
DS EIA
【预期用途】
本产品仅供科研使用。
25羟基维生素DS检测试剂盒（酶联免疫法）是一种酶联免疫测定，用于定量测定人血清或血浆中的25羟基维生素D及其他羟基化代谢物。结果应与其他临床和实验室数据相结合，以辅助临床医师对维生素D缺乏的评估。
【概要说明】
1. 维生素D是一个常用于与脂溶性类固醇衍生物（secosteroids）紧密相关的家族的总称。在阳光照射下，位于表皮中生长活跃层深处的7-脱氢胆固醇经“B”链的光裂解生成维生素D3前体，即维生素D3异构体。维生素D3和维生素D2也可通过饮食补充获得且来自于有限的食物数量。维生素D2与维生素D3的代谢方式类似1。维生素D存在于脂肪组织当中，与维生素D结合蛋白（VDBP）和白蛋白结合进入循环系统2。
2. 在肝脏中，维生素D羟化为25羟基维生素D，仍与VDBP结合进行循环。一小部分25(OH)D 在甲状旁腺激素和核钙离子水平的直接调节下在肾脏中进一步羟化，形成有生物活性的钙调节素1,25双羟基维生素D。维生素D进一步羟化和代谢产生水溶性和易分泌的复合物。肝脏维生素D25羟化酶活性未能紧密调节，且皮肤中维生素D3的改变或维生素D（D3或D2）的摄取将取决于25(OH)D循环水平的改变3。
3. 血清25羟基维生素D浓度被认为是测定全面维生素D状态的最可靠的指标，因而可用于测定患者是否出现维生素D缺乏4。
【检验原理】
25羟基维生素DS检测试剂盒（酶联免疫法）是一种酶联免疫测定，用于定量测定人体血清或血浆中的25羟基维生素D及其他羟基化的代谢产物。校准品、质控品和样本被标记有25羟基维生素D的生物素稀释。稀释后的样本在包被了高特异性羊25(OH)D抗体的微孔中室温孵育后冲洗。加入酶（辣根过氧化物酶）标记的抗生物素蛋白并有选择的与复合生物素结合，接着冲洗，再利用底物（TMB）显色。终止反应后采用酶标仪读取吸光度，颜色强度与25(OH)D浓度成反比。
【储存条件及有效期】
试剂盒自生产之日起在2-8℃下可保存12个月。
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试剂组份 |
开封后有效期 |
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生物素 25(OH)D溶液 |
8周 复溶后2-8℃下避光保存 |
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未用完的微孔板 |
8周 应立即放回附有干燥剂的铝箔袋中，封好铝泊袋，置于2-8℃下保存 |
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校准品/质控品 |
8周 启用后置于2-8℃下保存 |
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洗液 |
8周 配制后室温（18-25℃）保存 |
试剂可能变坏的迹象：
l 任何一个试剂组份中有反常微粒子出现。
l 校准品0吸光率下降。
l 曲线范围偏离正常位置。
【样本要求】
采用血清或血浆
(EDTA 或肝素钠或肝素锂或枸橼酸钠) 样本。整个实验应使用相同的样本类型。
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样本储存稳定性 |
周期 |
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室温下 |
72小时 |
|
2-8℃ |
72小时 |
|
冻融次数 |
3次 |
注意事项：
1） 样本采集后应尽快分离。长期储存应置于‐20℃或以下。避免样本反复冻融。
2） 在检测前，样本含有特殊物质应先离心。
3） 请勿使用热失活样本。
4） 某些样本采集管在特定情况下可能会影响检测结果。
5） 推荐完全遵从试管生产厂家的要求采集样本，特别是在采用初生管时。
6） 样本的储存和稳定性要求是各种实验室的通用建议。每个实验室应根据当地的法规和指引来建立其自身的样本处理和储存稳定性。
【产品性能指标】
代表性的性能指标显示如下，不同实验室的结果可能会有所不同。
检测范围
25羟基维生素DS检测试剂盒（酶联免疫法）检测范围为0-260 nmol/L（0-104 ng/mL）
测量范围（报告范围）：
25羟基维生素DS检测试剂盒（酶联免疫法）报告范围为12-260 nmol/L（4.8-104 ng/mL）。检测结果低于12 nmol/L（4.8 ng/mL）时应报告为＜12 nmol/L或＜4.8 ng/mL。
灵敏度
空白检测限（LoB）和定量检测限（LoQ）根据CLSI EP7-A来确定，通过检测60个空白和118个低水平样本获得。
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灵敏度 |
25（OH）D水平 |
|
LoB |
3.4 nmol/L（1.4 ng/mL） |
|
LoQ |
11.9 nmol/L（4.8 ng/mL） |
精密度
精密度是根据CLSI EP-5A2《定量检测方法之效价精密度评估》进行评估。10份血清样本采用3个批次的试剂在20天内每天2次双孔检测（每个样本检测次数n=80次）。
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样本 |
平均值（nmol/L） |
批内 |
总量 |
||
|
SD |
CV% |
SD |
CV% |
||
|
1 |
29.9 |
1.3 |
4.3% |
3 |
10.0% |
|
2 |
48.7 |
1.4 |
2.9% |
2.2 |
4.5% |
|
3 |
56 |
1.3 |
2.3% |
3.2 |
5.7% |
|
4 |
62.9 |
1.6 |
2.5% |
4.2 |
6.7% |
|
5 |
71.9 |
2 |
2.8% |
5.2 |
7.2% |
|
6 |
104.7 |
2.9 |
2.8% |
6 |
5.7% |
|
7 |
113.6 |
2.6 |
2.3% |
6.3 |
5.5% |
|
8 |
132.9 |
5.5 |
4.1% |
9.9 |
7.4% |
|
9 |
168.2 |
6.5 |
3.9% |
12.3 |
7.3% |
|
10 |
194.8 |
6.7 |
3.4% |
14.9 |
7.6% |
|
样本 |
平均值（ng/mL） |
批内 |
总量 |
||
|
SD |
CV% |
SD |
CV% |
||
|
1 |
12.0 |
1.3 |
4.3% |
3 |
10.0% |
|
2 |
19.5 |
1.4 |
2.9% |
2.2 |
4.5% |
|
3 |
22.4 |
1.3 |
2.3% |
3.2 |
5.7% |
|
4 |
25.2 |
1.6 |
2.5% |
4.2 |
6.7% |
|
5 |
28.7 |
2 |
2.8% |
5.2 |
7.2% |
|
6 |
41.9 |
2.9 |
2.8% |
6 |
5.7% |
|
7 |
45.4 |
2.6 |
2.3% |
6.3 |
5.5% |
|
8 |
53.2 |
5.5 |
4.1% |
9.9 |
7.4% |
|
9 |
67.3 |
6.5 |
3.9% |
12.3 |
7.3% |
|
10 |
77.9 |
6.7 |
3.4% |
14.9 |
7.6% |
线性
线性是根据CLSI EP-6A《定量检测程序中的线性评估：一种统计学方法》来进行评估。双孔检测不同浓度的25（OH)D样本。其结果均值和预设的浓度进行对比。检测前，样本通过低浓度患者样本稀释高浓度患者样本获得。
检测浓度与预期浓度的线性关系如下：
观测浓度=0.92×（预期浓度）+3.05nmol/L
观测浓度=0.92×（预期浓度）+1.22ng/L
回归系数R2=0.92
溯源性
25羟基维生素DS检测试剂盒（酶联免疫法）可溯源至同位素稀释-液相色谱-质谱法（ID-LC/MS/MS）25（OH）D参考测量程序(RMP),该程序用于分发VDSP样本的目标靶值。而同位素稀释-液相色谱-质谱法参考测量程序（ID-LC-MS/MS RMP）可溯源至美国国家标准技术研究所的标准参考材料(SRM) 297227，28.
68份样本在ID-LC-MS/MS RMP测得范围为22.5至198nmol/L（9.0ng/mL到98.6ng/mL）,采用25羟基维生素DS检测试剂盒（酶联免疫法）与ID-LC-MS/MS RMP对比评估其溯源性。两者的相关性用Passing–Bablok回归和Deming回归来描述。
Passing–Bablok回归：
EIA=0.97×(ID-LC-MS/MS RMP)+3.2 nmol/L
EIA=0.97×(ID-LC-MS/MS RMP)+1.3 ng/mL
斜率95% CI：0.88—1.07
截距95% CI：-3.9 — 9.3
nmol/L
-1.6—3.7
ng/mL
Deming回归：
EIA=1.05×(ID-LC-MS/MS RMP)+3.0 nmol/L
EIA=1.05×(ID-LC-MS/MS RMP)+1.2ng/mL
斜率95% CI：0.84-1.26
截距95% CI：-17.6 —11.6
nmol/L
-7.0 — 4.6
ng/mL
Pearson相关系数 r=0.96.
特异性
25（OH)D3特异性检测的分析样本只含有25（OH)D3。通过各种方法一共检测55个处于较大范围内的25（OH)D3样本【22.5-198nmol/L（9.0-79.2ng/mL），用ID-LC-MS/MS RMP确定】，数据处理采用Deming回归分析，结果方程如下：
EIA=0.99×（ID-LC-MS/MS RMP）+0.6nmol/L
EIA=0.99×（ID-LC-MS/MS RMP）+0.2ng/mL
Pearson相关系数R：0.98
类似的25（OH)D2特异性检测样本来源于含有25（OH)D2的患者。通过各种方法一共检测32个处于较大范围内的25（OH)D2样本【1.4-55.4nmol/L（0.6-22.2ng/mL），用ID-LC-MS/MS RMP确定】，数据处理采用Deming回归分析，结果方程如下：
EIA=0.88×（ID-LC-MS/MS RMP）+6.3nmol/L
EIA=0.88×（ID-LC-MS/MS RMP）+2.5ng/mL
Pearson相关系数R：0.96
|
分析物 |
交叉反应（%） |
|
Cholecalciferol(D3) |
0.30% |
|
Ergocalciferol(D2) |
6.10% |
|
24,25-(OH)2D3 |
>100% |
|
24,25-(OH)2D2 |
>100% |
|
1,25-(OH)2D3 |
115% |
|
1,25-(OH)2D2 |
105% |
|
3-epi-25(OH)D3 |
0.10% |
|
3-epi-25(OH)D2 |
0% |
|
Paricalcitol |
18% |